Главная


Стилист казань

Принципиальные подходы к оценке фагоцитоза

Проверка захвата частиц и бактерицидности. В экспериментах по захвату частиц и их накоплению в клетке используют микроорганизмы, частицы коллоидного угля или полистирола и др.

Для этого достаточно непродолжительной инкубации (20— 30 мин). Необходимо точно устанавливать соотношение частицы: клетки, например равное 10:1. Параллельно с захватом частиц исследуют, как влияет ингибирование обмена веществ, например охлаждение до 0 °С, на этот процесс. При определении бактерицидности исследуют не только захват экспериментальных микроорганизмов, но и их гибель внутри клетки. Процесс фагоцитоза можно исследовать в суспензии клеток, в монослое или in vivo (измерение клиренса). Во многих тест-системах одновременно определяют захват и опсонизацию. Это требует совместного и раздельного тестирования клеток, опсонинов и частиц. Исследование комбинации этих трех факторов представляет практические трудности, его результаты трудно интерпретировать.

Исследование дегрануляции. Эксперимент включает в себя определение ассоциированных с гранулами ферментов внутри вакуоли или во внеклеточной среде. Полуколичественные методы основаны на гистохимических реакциях клетки, количественные — на выделении вакуолей. Внеклеточную дегрануляцию определяют по уровню ферментативной активности в среде, что предполагает наличие корреляции между секрецией содержимого гранул во внешнюю среду и внутрь вакуолей.

Определение кислородного обмена фагоцитов. Метод основан на способности ассоциированных с плазматической мембраной оксидаз восстанавливать кислород с образованием супероксиданионов или перекиси водорода. Есть основания предполагать, что активация кислородного обмена может служить индикатором процесса захвата. Существуют разнообразные методы прямого определения перекиси водорода и супероксиданиона.