Главная


Справка из КВД

Получение тканевых экстрактов. Обсуждение

О механизмах извлечения антигенных экстрактов из тканей при помощи 3 М KCI мало что известно. Вероятно, этот процесс протекает с участием аутоферментативных реакций. Метод получения растворимых мембранных компонентов при помощи гипертонических солевых растворов имеет определенные преимущества перед методами, основанными на использовании ферментов (р-глюкозидаза) или детергентов (Тритон Х-100).

Ферменты способны вызывать разрушение антигенных структур; при использовании детергентов возникают сложности с их последующим удалением из готового препарата. К числу недостатков метода с применением 3 М KCI относятся:

— изменение растворимости отдельных активных компонентов при уменьшении концентрации соли в ходе получения препарата;

— относительно небольшой выход антигенов;

— обусловленная одноэтапным методом выделения контаминация активных компонентов мембраны компонентами других составных частей клетки.

Обработка 3 М KCI вызывает селективное высвобождение некоторых важных гликопротеидов из состава мембраны. До недавнего времени большая часть экстрактов, полученных с помощью 3 М KCI, использовалась в нефракционированном виде (или добавлялась стадия осаждения 50% сульфатом аммония) в реакциях клеточного иммунитета: кожной пробе, реакции торможения миграции лейкоцитов, реакции ингибирования цитотоксичности, РЭПФ, а также все чаще в РТАЛ. После того как стала очевидной гетерогенность экстрактов, были предприняты многочисленные попытки их фракционирования биохимическими или иммунохимическим методами, а также при помощи электрофореза.

Обнаружилось, что одна и та же фракция может проявлять различные активности в зависимости от метода определения. Общим является то, что в области отн. мол. масс 80 000—160000 (Р2) в основном обнаруживаются гистоспецифические и отдельные индивидуальные антигены, а в области отн. мол. масс 50000— 70000 (РЗ) и в области с отн. мол. массами более 200000 (Р1) выявляются в основном перекрестно реагирующие антигенные компоненты. Следует подчеркнуть, что объединение антигенов в отдельные фракции с определенными свойствами (Р1—РЗ) имеет смысл только в отношении некоторых из них, охарактеризованных в РЭФП, АНТ и ААО.

При исследовании таких антигенов в других иммунологических тест-системах вышеприведенное разделение антигенов на группы в соответствии с их активностью будет лучшей гарантией правильного выбора антигена для соответствующего теста. К этому всегда рекомендуется прибегать, когда нет точной биохимической характеристики антигена. Гетерогенность экстрактов, получаемых с применением 3 М KCI, указывает на причину противоречивых результатов, наблюдаемых при работе с грубыми экстрактами тканей, и на необходимость частичной очистки компонентов с известными иммунологическими свойствами. Новые данные об очистке ААО и АНТ при помощи лектинов, электрофокусирования, иммунных сорбентов или моноклональных антител позволяют надеяться, что в скором времени будут получены новые субстраты для исследования реакций клеточного иммунитета.