Главная


read

Распознавание инсулинов

Бычий и бараний инсулины имеют совершенно одинаковую третичную структуру и различаются лишь одной аминокислотой (остаток 9 в А-цепи). Клоны индукторных клеток мыши, иммунизированной бычьим инсулином, активируются под действием бычьего, но не бараньего инсулина; клоны, полученные от мышей, иммунизированных бараньим инсулином, обладают обратной специфичностью. Эти данные наряду с другими показывают, что индукторная Т-клетка может отличить ассоциированные с молекулой класса II белки, различающиеся всего по одной аминокислоте.

Хотя ясно, что специфичность активации индукторных клонов исключительно высока, значительно хуже доказано, что эти клоны синтезируют растворимые белки, способные различать два антигена, не связанные с молекулами класса II. Одной из причин, дающих основание подозревать, что такие индукторные молекулы могут играть роль в антиген-специфической стимуляции В-клеток, служат результаты исследования молекул, синтезируемых и, вероятно, секретируемых клонами Т-клеток, специфически активированных бычьим или бараньим инсулином. Пептиды, синтезируемые клетками, специфичными к бычьему инсулину, связываются с ним в растворе с В 10— 100 раз большей, чем при связывании с инсулином барана. Обратная ситуация наблюдается в случае пептидов, синтезируемых индукторными клетками, специфичными к бараньему инсулину.

При исследовании пептидов, синтезируемых индукторными клетками, специфичными к тринитрофениловому (ТНФ) или нитрофенилацетиловому (НФА) гаптенам, выяснилось, что биосинтетически меченная связывающаяся с гаптеном фракция пептидов в присутствии белков, конъюгированных одновременно с флуоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ) и ТНФ или НФА, активирует В-клетки, специфичные к ФИТЦ. В то же время эти пептиды не способны активировать ФИТЦ-специфичные Б-клетки в присутствии смеси ФИТЦ-белков с ТНФ- или НФА-белками. Наиболее вероятное объяснение этих результатов состоит в том, что индукторные клетки выделяют антигенсвязывающие молекулы, которые находят и активируют только те В-клетки, на поверхности которых, возможно в комплексе с молекулой класса II, находится антигенная детерминанта. Исследования, проведенные совсем недавно, показали, что эти антиген-специфические индукторные пептиды стимулируют только те В-клетки, которые несут специфические продукты генов МНС класса II: это наводит на мысль о том, что секретируется рецептор Т-клеток, который связывается с продуктами класса II и антигеном, расположенными на В-клетках.

В целом эти исследования показали, что индукторные клетки синтезируют и, возможно, секретируют молекулы, способные к специфическому связыванию. Этим может объясняться специфичность активации клеток под действием антигена и продуктов класса II. Вообще говоря, связанные с клетками рецепторные молекулы, ответственные за специфическую активацию индукторных клеток, могут быть продуктами генов, отличающихся от генов, кодирующих эти пептиды. Однако наиболее простая интерпретация этих данных за-ключается в том, что секретируемые антигенсвязывающие индукторные молекулы представляют собой модифицированную форму рецептора.

Если эти результаты отражают общее свойство индукторных клеток, то они означают, что совместное распознавание индукторными клетками продуктов генов МНС класса II и антигенных детерминант происходит с помощью различных участков связывания. Описанные результаты не дают ответа на вопрос, находятся ли участки связывания молекул класса II и антигена на одном пептиде или расположены на разных пептидах. Первая возможность лучше согласуется с некоторыми другими наблюдениями и была подтверждена Кэпплером и др. в изящных экспериментах по слиянию разных клонов Т-клеток.

Важно отметить, что в отличие от пептидов, синтезируемых и секретируемых индукторными клонами, в отношении самих индукторных клеток трудно показать, что они специфично связывают свободные антигены (хотя они могут связывать комплексы антигена и молекул класса II). В этом отношении интересны следующие два наблюдения. Во-первых, специфичность связывания секретируемыми индукторными молекулами полностью соответствует специфичности определяемого МНС процесса активации клонированных индукторных клеток под действием антигена. Во-вторых, по данным электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии восстановителя и додецилсульфата натрия секретируемые индукторные молекулы, связывающие свободные антигены, построены по меньшей мере из двух полипептидных цепей. Связывание секретируемых пептидов с антигеном может определяться вкладом обеих тесно взаимодействующих цепей. В этом случае для специфичного связывания антигена необходимо соединение двух этих полипептидов и в мембране индукторной клетки.

Две антигенсвязывающие цепи могут, например, в нормальных условиях существовать в липидном бислое мембраны индукторной клетки раздельно и соединяться только при одновременном распознавании молекул класса II и антигена на поверхности антиген-презентирующих клеток (АПК). Их соединение может сопровождаться энзиматической реакцией сшивания цепей между собой и последующей секрецией антигенсвязывающих индукторных молекул. Нет необходимости указывать на весьма спекулятивный характер этого объяснения — для получения окончательного ответа необходимы дальнейшие исследования.